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CRISPR基因編輯篩選一站式服務(wù): 物種不限，類型多樣

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首頁 > CRISPR基因編輯篩選一站式服務(wù)

CRISPR基因編輯篩選一站式服務(wù)

泓迅生物提供CRISPR一站式基因編輯服務(wù)，包括sgRNA序列設(shè)計(jì)、芯片合成、文庫構(gòu)建、NGS驗(yàn)證、病毒包裝、文庫細(xì)胞pool構(gòu)建、高通量篩選和生信分析等。我們成功交付動植物和微生物等30+物種類型，數(shù)百個高質(zhì)量CRISPR sgRNA文庫，滿足不同客戶對文庫的定制化需求，提供基因功能篩選全套解決方案。

服務(wù)優(yōu)勢

數(shù)十種模式物種，定制化sgRNA設(shè)計(jì)
豐富的sgRNA表達(dá)載體，提供轉(zhuǎn)染級質(zhì)粒
正確率> 80%-99%
覆蓋度>99%
均一性< 1.6-10
從sgRNA設(shè)計(jì)、文庫構(gòu)建到慢病毒包裝的一站式服務(wù)

服務(wù)詳情

服務(wù)項(xiàng)目

服務(wù)詳情

周期
sgRNA設(shè)計(jì)

針對目標(biāo)基因群進(jìn)行sgRNA序列設(shè)計(jì)(條數(shù)可選)

1-2周
芯片合成

將所設(shè)計(jì)的所有sgRNA及陰性對照合成在一張芯片上

3-4周
sgRNA文庫構(gòu)建

將sgRNA構(gòu)建到客戶的目標(biāo)載體上

2-3周
文庫質(zhì)粒大抽

根據(jù)發(fā)貨量進(jìn)行轉(zhuǎn)染級質(zhì)粒抽提

1周
文庫質(zhì)檢及NGS驗(yàn)證(可選)

庫容量大于100x

文庫正確率大于80%

文庫的均一性指標(biāo)小于10

2-3周
病毒包裝(可選)

慢病毒包裝，病毒滴度: 10⁸TU/ml

2-3周
文庫細(xì)胞pool構(gòu)建

抗性篩選測試

慢病毒量及細(xì)胞數(shù)評估

抗性篩選

NGS檢測

6-9周
高通量篩選

正向篩選實(shí)驗(yàn)、反向篩選實(shí)驗(yàn)

2-3周
藥物抗性實(shí)驗(yàn)、報(bào)告基因檢測

服務(wù)流程

CRISPR基因編輯篩選服務(wù)流程

案例分享查看詳細(xì)

CRISPR sgRNA文庫構(gòu)建與篩選應(yīng)用實(shí)例

Genome-Scale CRISPR-Cas9 Knockout Screening in Human Cells Ophir Shalem et al. Science 343, 84 (2014)

已知藥物功能篩選其耐藥靶點(diǎn)的方案：

1.明確該藥物功能及其致死工作濃度。

2.構(gòu)建 CRISPR-Cas9 gRNA慢病毒文庫并侵染細(xì)胞，構(gòu)建整合CRISPR-Cas9 gRNA的細(xì)胞混合克隆。

3.篩選：高濃度藥物短期內(nèi)持續(xù)作用細(xì)胞混合克隆，成活的細(xì)胞即為產(chǎn)生耐藥性的細(xì)胞，其耐藥性的產(chǎn)生原因是 CRISPR-Cas9 gRNA導(dǎo)致的基因改變。

4.存活的細(xì)胞通過二代測序，比對得到gRNA 信息，從而推斷出起作用的基因靶點(diǎn)。

常見問題

常見問題

基因編輯是對質(zhì)粒還是基因組進(jìn)行編輯？目前我們已經(jīng)構(gòu)建的成熟的編輯系統(tǒng)，涉及到的物種有哪些？按實(shí)驗(yàn)?zāi)康?，可以分為哪幾類?/a>

基因編輯是對基因組進(jìn)行編輯。目前已經(jīng)成熟的物種有大腸桿菌，釀酒酵母和畢赤酵母。

按實(shí)驗(yàn)?zāi)康目煞譃椋夯蚯萌?、基因敲除、點(diǎn)突變。

CRISPR/Cas9和CRISPR/Cas12的優(yōu)劣勢是？

簡單來說，原核基因編輯相差不大，我們目前使用的是CRISPR/Cas9基因編輯。真核Cas12a更有優(yōu)勢。

與Cas9相比：

1 Cas12蛋白小，質(zhì)?；虻鞍赘菀走M(jìn)入細(xì)胞

2 從經(jīng)濟(jì)方面來講，Cas12a用crRNA進(jìn)行編輯，crRNA約40-44nt，其合成的價(jià)格遠(yuǎn)低于sgRNA(約100nt)

3 識別位點(diǎn)PAM序列不同。Cas12a核酸酶識別5’-TTTV，切割產(chǎn)生交錯末端。Cas9切割產(chǎn)生平末端

基因編輯的方法分類是？

1.同源重組

2.核酸酶

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