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基因合成需要客戶提供質(zhì)粒。
可以,就是基因合成,只需要客戶提供抗體的重鏈和輕鏈序列就可以。
我們目前的抗體表達(dá)載體是鼠源和人源,可以合成goat,chicken或者sheep的全長(zhǎng)抗體序列裝到pTT5里進(jìn)行表達(dá)。
大概需要1-2ug即可。
有慢病毒載體:pCDH-CMV-MCS-EF1-copGFP和pCDH-CMV-MCS-EF1-Puro.可以問下客戶的研究目的.?如果客戶做蛋白的建議還是不要建議這兩個(gè)載體。
轉(zhuǎn)染細(xì)胞一般用flag檢測(cè)表達(dá)情況。如果有標(biāo)簽可以做WB來鑒定是否表達(dá)。用熒光載體或QPCR檢測(cè)是否轉(zhuǎn)染細(xì)胞。若質(zhì)粒沒有加熒光可以用QPCR檢測(cè)。
1、引物 更換引物嘗試,設(shè)置陽性對(duì)照(其他同載體的質(zhì)粒)和陰性對(duì)照(空載體)看是否引物問題。 2、PCR擴(kuò)增體系 一般問題不大,可以看下退火溫度等信息。 3、抗性是否加錯(cuò),抗性濃度是否正常。
選擇合適的表達(dá)系統(tǒng)需考慮蛋白質(zhì)的大小、復(fù)雜性、翻譯后修飾需求、表達(dá)量和純度要求。原核系統(tǒng)適用于簡(jiǎn)單蛋白,哺乳動(dòng)物系統(tǒng)適用于復(fù)雜蛋白。
包涵體形成通常是由于蛋白質(zhì)在細(xì)胞中錯(cuò)誤折疊導(dǎo)致的。這可能與蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)復(fù)雜性或高表達(dá)量有關(guān)。
內(nèi)毒素可以通過內(nèi)毒素去除柱、離子交換色譜等方法去除,確保最終產(chǎn)品的純度和安全性。
定點(diǎn)突變技術(shù)被廣泛地應(yīng)用于蛋白質(zhì)功能位點(diǎn)結(jié)構(gòu)研究、酶活性優(yōu)化、DNA元件功能或元件互作、基因治療等方面。
是的,我們的定點(diǎn)突變服務(wù)可以在DNA的任何位點(diǎn)引入突變。